Le professeur Layton, Luke et Remi reçoivent une lettre de Jenice Kaitly, la célèbre cantatrice d'opéra, qui les invite à assister à une de ses représentations, qui sera sa dernière. Mais ce n'est pas tout, elle leur demande aussi de l'aider à résoudre un mystère. Son amie Melina qui avait disparu un an auparavant, est réapparu sous l'apparence d'une petite fille de sept ans, qui déclare avoir découvert la vie éternelle. Les trois amis se rendent donc à l'opéra de Crown Petone, mais lorsqu'ils arrivent sur place, le travail les attend déjà. Le pianiste, Ozro Vislar, a piégé l'opéra avec un jeu dont le gagnant aurait la vie éternelle...